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基因編輯陽性細(xì)胞篩選是指在基因編輯實(shí)驗(yàn)(如CRISPR/Cas9)后,通過特定方法識別和分離出成功發(fā)生目標(biāo)基因修飾的細(xì)胞。常用的篩選方法包括抗生素篩選(如利用抗性基因標(biāo)記)、熒光蛋白標(biāo)記篩選、PCR或測序驗(yàn)證等。這一過程對于獲得純合或雜合突變細(xì)胞系、研究基因功能或進(jìn)行疾病模型構(gòu)建至關(guān)重要。
CRISPR/Cas12b系統(tǒng)實(shí)驗(yàn):CRISPR/Cas12b(原稱 C2c1)屬于 Class 2 Type V-B 型 CRISPR 系統(tǒng),是繼 Cas9 和 Cas12a 后的重要基因編輯工具。
CRISPR/Cas12a系統(tǒng)實(shí)驗(yàn):CRISPR/Cas12a(原稱 Cpf1)屬于 Class 2 Type V 型 CRISPR 系統(tǒng),是細(xì)菌與古菌的適應(yīng)性免疫機(jī)制,用于識別并切割入侵的病毒或質(zhì)粒 DNA。與 Cas9 相比,其du特的工作模式使其在基因編輯、分子檢測及多基因調(diào)控中展現(xiàn)顯著優(yōu)勢。
細(xì)胞基因編輯(又稱基因組編輯)是指利用分子工具在活細(xì)胞中定點(diǎn)插入、刪除或替換DNA堿基,從而改變基因功能或調(diào)控元件表達(dá)的技術(shù)。其核心機(jī)制依賴于DNA雙鏈斷裂(DSB)的誘導(dǎo)與修復(fù)
KI小鼠模型是一種通過基因編輯技術(shù)將外源基因序列(如人類基因、突變位點(diǎn)或報告基因)精準(zhǔn)插入小鼠基因組特定位點(diǎn)而構(gòu)建的遺傳修飾模型。與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因(TG)模型的隨機(jī)插入不同,KI模型通過CRISPR/Cas9、同源重組等技術(shù)實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)整合,確保外源基因在天然啟動子調(diào)控下以更接近生理水平的表達(dá),大幅提升了疾病模擬的準(zhǔn)確性。
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